王玉堂 全国水产技术推广总站

七、制剂与菌种选择

（一）蛭弧菌制剂

蛭弧菌有3个重要的种，其模式菌株是Bdellovbrio bacteriovo－ru。Bacteri意为细菌，ovoru意为捕食。Bdellovbrio bacteriovoru的原意为类似水蛭样的细菌食者。1981年，秦生巨等在国内首次报道对这类的研究时，鉴于Bdellovbrio bacteriovoru有类似噬菌体寄生和溶解细菌的特性，但它又具有典型的菌细胞结构，故译为噬菌蛭弧菌。蛭弧菌属内只有噬菌蛭弧菌专营寄生生活，其它2个种的蛭弧菌兼营寄生或腐生生活，唯有噬菌蛭弧菌可作为噬菌蛭弧菌微生物生态制剂的生产用菌株。

噬菌蛭弧菌微生物制剂符合国际通用的四大标准：一是菌种标准。微生物生态制剂的生产用菌种是正常微生物群的成员或其生长促进菌种；对这些菌必须进行严格的分类、鉴定；这些菌种在自然生态环境中必须无毒无害，原则上这些菌种来源于自然生态环境；二是活菌数量。微生物生态制剂的有效成分主要是活菌，而活菌的数量是质量控制的最重要指标之一。三是安全性。对宿主或动物模型原定位系统无毒无害 和安全有效。四是生态效应。具有某些特定的生态效应，如生物拮抗效应、生长促进效应、防病治病效应等。噬菌蛭弧菌除完全具有其它微生物制剂所具有的生态效应外，还具有独特的“寄生”和“溶解”有害菌的生态效应。

（二）菌种的选择

作为微生物制剂的种类很多。作为微生物制剂用的菌种选择，其安全性或非病原性是筛选的首要条件，既使促进生长或其它生产性能，病原菌绝对不予考虑。因此，必须从菌种的安全性出发，并对该菌种可能的代谢物质进行系统的研究和分析。菌种是制剂产品质量控制的源头，是产量、质量和效果的重中之重，必须是具有独特生态效应和生物学性状稳定的特定菌株，且应由国家法定的菌种保藏管理机构经过严格地分类、鉴定，既使是符合这些要求，也必须每年鉴定1次，确保其原有的生物学性状没有发生变化后才能使用。因为一株现在无毒无害无副作用的菌株，并不等于永远不会发生理化、微生物毒素和菌种本身原而引起的负性突变，所以。应定期对生产用菌种进行定期的安全性检测或评价。自行分离、鉴定，未经过国家菌种保藏管理机构鉴定确认的菌种，是不能用于微生物制剂生产的。

用于微生物制剂生产的菌种，应来源于水或泥土、生物体内等自然界；必须是经过严格鉴定和分类的。否则不可用于其制剂的生产之用，也不准任何用途的使用。

（三）蛭弧菌制剂的生产工艺

1.制剂生产工艺

除非蛭弧菌菌株发生突变，成为腐生或兼性寄生菌株，否则是不能在人工培养基上生长的，也就是说，蛭弧菌是不能用普通细菌培养方式培养的，不适用于人工合成的培养基，因其繁殖方式是复制，而不是像细菌那样的公孽繁殖，只能利用宿主菌物质才能复制，而且复制量较低，所以，市售产品往往标明蛭弧菌产品的含量达每毫升多少亿，这胚是不可信的。专性寄生的蛭弧菌菌株是经过严格的胞内寄生物，它不能利用环境中的营养物质，因此，用于蛭弧菌微生物制剂发酵培养的宿主菌细胞必须经过洗涤、离心，除去携带的培养基成分浓厚的宿主菌悬液。蛭弧菌的生长繁殖过程中，是在宿主细胞内完成的，是利用宿主的遗传物质复制子代，不同于其它细菌；其繁殖方式类似于噬菌体。因此，蛭弧菌微生物制剂的生产工艺流程也不同于普通细菌的发酵生产工艺。严格地说，蛭弧菌微生物制剂是含有宿主菌的、半透明的、不含化学物质的、无酸臭味的混合物，它的含量即使是蛭弧菌制剂的发酵母（原）液，也绝对不会大于108cfu/ml。

2.制剂的功能特征及生态效应

蛭弧菌的微生物制剂不含任何抗生素及其它化学物质，可不同程度地替代抗生素及其它化学药物使用，减少或消除抗生素或其它药物的残留。对可见的革兰氏阴性菌有效强的寄生和杀来功能，可有效地防治多种细菌性疾病，提高水生动物的抗病能力；促进水生动物的新陈代谢，而对水生动物无生长抑制作用；发酵过程中所产生的代谢物质可分解、转化水体中的亚硝酸盐，减少蛋白质向氨和胺转化，减轻水体中的氨和有机质的污染，并能调节水质，平衡水体的PH值，改善养殖水质。虽然其起效速度不用抗菌素生素及其它化学药物，但效果要持续15天以上，是任何抗生素及其它化学药物所不及的。

尽管蛭弧菌的微生物制剂与其它生物制剂不同，蛭弧菌对许多抗菌药药具有较强的耐受性，但也禁止将蛭弧菌微生物制剂与抗生素类药物配伍使用，以防其活性特质被高浓度的抗菌药物所破坏。蛭弧菌微生物制剂具有起效慢而药效持久的特点，因此，应在水生动物疾病发生前或发病初期使用。